Препаративная ВЭЖХ система для очистки РНК

Терапевтический потенциал мРНК получил широкое признание в период активных исследований и разработки вакцин против COVID-19. Основная идея заключается в доставке в организм человека информационной РНК, кодирующей терапевтические белки, которые активируют иммунную систему для борьбы с вирусом.

По сравнению с полноразмерными терапевтическими белками, мРНК значительно проще и быстрее синтезировать и вводить. Однако для достижения требуемого качества и безопасности фармацевтической субстанции необходимо обеспечить высокую степень её очистки, для чего критически важны хроматографические методы.

Ключевым аспектом хроматографии РНК является правильно сконфигурированная система ВЭЖХ. Для успешного разделения и очистки мРНК процесс должен проводиться при повышенной температуре, что приводит к денатурации РНК, упрощает её вторичную структуру и способствует эффективному разделению. Повышенная температура в сочетании с бинарным градиентом между ацетонитрилом и водой, как это реализуется в методе обращенно-фазовой хроматографии, обеспечивает не только эффективную очистку, но и инактивацию и денатурацию РНКаз.

Специализированная система очистки РНК — это комплексное решение, специально разработанное для высокоэффективной очистки мРНК. Система включает в себя насос с трехканальным градиентом на стороне низкого давления, обеспечивающий стабильное формирование градиента между водной фазой (с добавками, например, 1,0 М TEAA, pH 7) и ацетонитрилом. Благодаря наличию отдельного входного порта для образца, насос также позволяет напрямую наносить образцы большого объёма на хроматографическую колонку.

Скорость потока регулируется в диапазоне от 10 до 80 мл/мин. Образец может вводиться с помощью встроенного инжектора, напрямую или через петлю Variloop. После ввода растворитель и образец подогреваются в нагревателе элюента и направляются на хроматографическую колонку, которая дополнительно обогревается с помощью термомуфты — это обеспечивает оптимальные условия для термической очистки. Идентификация продукта осуществляется с помощью детектора с регулируемой длиной волны, обычно установленного на 260 нм, либо другой длины волны по выбору пользователя. После завершения процесса очистки целевые фракции разделяются с помощью автоматического фракционирующего крана.